In der Antike galt der Fluss als die Grenze zwischen Europa und Asien. Im hebräischen Buch der Jubeljahre wird er als Teil der Grenze erwähnt, beginnend mit seinem westlichsten Punkt bis zu seiner Mündung, zwischen der Parzelle von Japheth im Norden und der von Schem im Süden, Söhne Noahs. Zur Zeit der alten Skythen war sie im Griechischen als Tanaïs bekannt und ist seitdem eine wichtige Handelsroute.
Tanais erscheint in altgriechischen Quellen als Name des Flusses und einer Stadt an ihm, die in den Sümpfen von Maeotian liegt. Der Name leitet sich jedoch vom skythischen (iranischen) Dānu "Fluss" ab, ähnlich dem heutigen ossetischen don "Fluss".
An seinem östlichsten Punkt kommt der Don in die Nähe der Wolga, und der Wolga-Don-Kanal (Länge ca. 105 km (65 Meilen)), der beide Flüsse verbindet, war eine wichtige Wasserstraße. Die Chasaren-Festung Sarkel dominierte diesen Punkt im Mittelalter. In diesem Teil des Flusses fand die Operation Uranus statt, einer der Wendepunkte des Zweiten Weltkriegs.
Der Don hat den Don-Kosaken, die das fruchtbare Tal des Flusses im 16. und 17. Jahrhundert besiedelten, seinen Namen gegeben. In der modernen Literatur spielt der Don eine zentrale Rolle in den Werken von Michail Scholochow, einem Kosaken aus der Staniza von Wjoschenskaja.