Färben
Die Färbung wird in der Mikroskopie verwendet, um Zellen und Gewebe besser sichtbar und verständlich zu machen.
Dies ist eine Möglichkeit, den Kontrast im mikroskopischen Bild zu verbessern. Flecken und Farbstoffe werden in der Biologie und Medizin häufig verwendet, um Strukturen in biologischen Geweben hervorzuheben, oft mit Hilfe verschiedener Mikroskope.
Die Färbung kann an lebendem Gewebe (in vivo) oder an totem Gewebe (in vitro) durchgeführt werden.
Hochmoderne Mikroskopie: Kerne werden mit DAPI blau angefärbt, Mikrostörungen werden durch einen Antikörper grün markiert und Aktin-Filamente werden mit Phalloidin rot markiert
Ein typischer Mikroskopaufbau. Ein gefärbtes Präparat auf einem Glas-Objektträger wird auf den Tisch eines Mikroskops montiert.
Vorbereitung
Totes Gewebe muss "fixiert" werden, damit es nicht zerfällt. Das Fixiermittel hält die Struktur so, wie sie ist. Nach der Fixierung kann ein Gewebe in dünne Scheiben geschnitten und auf eine Reihe von Objektträgern aus Glas gelegt werden. Gelegentlich ist es notwendig, Zellmembranen aufzulösen, damit grosse Farbstoffmoleküle in die Zellen gelangen können. Standards werden in der Zeitschrift Biotechnic & Histochemistry veröffentlicht.
Färben
Am einfachsten ist es, Objektträger und Probe in eine Farbstofflösung zu tauchen, diese dann zu spülen und zu untersuchen. Die verwendeten Flecken sind zertifizierte Flecken, die von der Kommission für biologische Flecken geprüft wurden.
Färbende Bakterien
Die Gram-Färbung wird zur Klassifizierung von Bakterien verwendet. Sie basiert auf der Zusammensetzung ihrer Zellwand. Die Gram-Färbung verwendet Kristallviolett zur Färbung der Zellwände, Jod als Beizmittel und einen Gegenfarbstoff, der alle Bakterien markiert.
Gram-positive Bakterien färben dunkelblau oder violett. Ihrer Zellwand fehlt die bei gramnegativen Bakterien vorkommende sekundäre Membran und Lipopolysaccharidschicht.
Auf den meisten Gram-gefärbten Präparaten sind gramnegative Organismen rot oder rosa von der Gegenfärbung.
Färben von Geweben
Die Hämatoxylin- und Eosin-Färbung wird in der Histologie häufig für dünne Gewebeschnitte verwendet. Hämatoxylin färbt Zellkerne blau, während Eosin Zytoplasma, Bindegewebe und andere extrazelluläre Substanzen rosa oder rot färbt.
Eosin wird von den roten Blutkörperchen stark absorbiert und färbt sie leuchtend rot. In einem kunstvoll hergestellten H & E-Präparat sind die roten Blutkörperchen fast orangefarben, und Kollagen und Zytoplasma (vor allem Muskeln) färben sich unterschiedlich rosa. Hämatoxylin färbt den Zellkern und andere saure Strukturen (wie z.B. RNA-reiche Teile des Zytoplasmas und die Matrix des hyalinen Knorpels) blau. Im Gegensatz dazu färbt Eosin das Zytoplasma und Kollagen rosa.
Eine schnelle und einfache Färbung, die auf Blutausstrichen und menschlichen Wangenzellen verwendet wird, ist Methylenblau, das die Kerne färbt. Es gibt viele andere Spezialfärbungen, einige fluoreszieren unter Speziallicht.
Mikroskopische Ansicht einer mit Hämatoxylin und Eosin gefärbten histologischen Probe von menschlichem Lungengewebe
